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病理論壇在線咨詢GS環(huán)保組織制備試劑處理組織免疫組化染色對(duì)比實(shí)驗(yàn)結(jié)果
GS環(huán)保組織制備試劑處理組織
免疫組化染色對(duì)比實(shí)驗(yàn)結(jié)果
病理技術(shù)流程中對(duì)組織的制備通常使用成本較低的甲醛與二甲苯，病理工作者長(zhǎng)期承受甲醛、二甲苯等有毒有害試劑的侵害。哈爾濱格林公司研發(fā)的GS環(huán)保組織制備試劑（包括固定、脫水、透明）該產(chǎn)品以無(wú)醛、無(wú)苯等環(huán)保性得到認(rèn)可，近年來(lái)在全國(guó)許多二級(jí)、三級(jí)醫(yī)院得到應(yīng)用。在寧波病理中心的免疫組化染色技術(shù)流程中，該產(chǎn)品是否能滿足病理診斷的需要，需要在我中心的免疫組化染色操作技術(shù)流程條件下對(duì)其可靠性進(jìn)行驗(yàn)證。
一、實(shí)驗(yàn)方案設(shè)計(jì)
實(shí)驗(yàn)分兩組，一組為實(shí)驗(yàn)組以哈爾濱格林公司GS系列環(huán)保組織制備試劑（包括固定、脫水、透明）進(jìn)行組織取材后組織制備，一組為對(duì)照組以常規(guī)10%福爾馬林和二甲苯進(jìn)行取材后組織制備。取寧波病理中心常規(guī)取材后具有代表性的新鮮標(biāo)本18個(gè)，每個(gè)標(biāo)本分別取兩塊，分別采用實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組試劑，分別置于ThermoPT420和Leica Prorie脫水機(jī)進(jìn)行固定、脫水、透明浸蠟。使用一致抗體檢驗(yàn)試劑進(jìn)行免疫組化染色。切片經(jīng)由高級(jí)職稱的病理醫(yī)師分別對(duì)比觀察，***終核定其病理診斷的可靠性和應(yīng)用性。
二、實(shí)驗(yàn)過(guò)程
（一）試劑選定
1. 哈爾濱格林公司組織處理試劑
1.1 GSA-01（組織固定液）
1.2 GSA-02（組織脫水液I）
1.3 GSA-03（組織脫水液II）
1.4 GSA-04（組織透明液）
2. 常規(guī)組織處理試劑
2.1 10%福爾馬林
2.2 75%酒精
2.3 95%酒精
2.4 無(wú)水酒精
2.5 二甲苯
3. 抗體
3.1 ER
3.2 PR
3.3 HER-2
3.4 CK8
3.5 CK19
3.6 CK20
3.7 TTF-1
3.8 CD3
3.9 CD20
3.10 Ki-67
（二）標(biāo)本選定
寧波市臨床病理診斷中心手術(shù)標(biāo)本（常規(guī)取材后），每個(gè)標(biāo)本取1-1.5cm×0.5-1cm×0.3cm大小2塊，分別用于實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組。
組織類(lèi)型包括：
1. 子宮內(nèi)膜與肌層×3
2. 肺組織×3
3. 扁桃體×3
4. 乳腺導(dǎo)管內(nèi)原位癌×1
5. 乳腺纖維腺瘤×2
6. 甲狀腺×3
7. 胃癌×1
8. 胃壁組織×2
9. 結(jié)腸×3
10. 肝組織×3
（三）實(shí)驗(yàn)方法
1. 實(shí)驗(yàn)組用ThermoPT420脫水機(jī)進(jìn)行脫水機(jī)內(nèi)固定、脫水，透明及浸蠟，具體程序：
GSA-01 2h
75%酒精 30min
75%酒精 30min
80%酒精 1h
GSA-02 40min
GSA-02 1h
GSA-03 40min
GSA-03 1h
GSA-04 1h
GSA-04 1.5h
石蠟 1h
石蠟 1h
石蠟 1h
石蠟 1h
2. 對(duì)照組用LeicaPlorie脫水機(jī)進(jìn)行脫水機(jī)內(nèi)固定、脫水、透明及浸蠟，具體程序：
10%福爾馬林 2h
75%酒精 30min
75%酒精 30min
85%酒精 1h
95%酒精 40min
95%酒精 1h
無(wú)水酒精 40min
無(wú)水酒精 1h
二甲苯 1h
二甲苯 1h
石蠟 1h
石蠟 1h
石蠟 2h
3. 免疫組化染色程序：
對(duì)照組及實(shí)驗(yàn)組ER、PR、HER-2、CK20、CD3、CD20、Ki-67的切片均按Roch VENTANA免疫組化儀標(biāo)準(zhǔn)優(yōu)化程序進(jìn)行染色并封片。
對(duì)照組及實(shí)驗(yàn)組CK8、CK19的切片均按DOKO免疫組化儀標(biāo)準(zhǔn)優(yōu)化程序進(jìn)行染色并封片。
4. 切片判讀
由3名具有高級(jí)職稱的病理醫(yī)師分別對(duì)比觀察切片，并記錄。
（四）實(shí)驗(yàn)對(duì)比結(jié)果
經(jīng)顯微鏡下對(duì)比實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組發(fā)現(xiàn)：1）兩組均背景干凈，陽(yáng)性部位準(zhǔn)確；2）乳腺組織及子宮內(nèi)膜ER、PR 、Ki-67檢測(cè)中，實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞核表達(dá)呈棕色，對(duì)照組陽(yáng)性細(xì)胞核呈棕黑色，但陽(yáng)性表達(dá)的范圍與陽(yáng)性率一致；3）其余各項(xiàng)指標(biāo)，兩組間表達(dá)范圍及染色程度均一致。
三、實(shí)驗(yàn)對(duì)比結(jié)論
實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組在常用免疫組化染色對(duì)比研究中一致性高，無(wú)顯著性差異，均達(dá)到診斷要求。表明經(jīng)哈爾濱格林公司組織處理試劑固定脫水透明的標(biāo)本與常規(guī)試劑固定脫水透明的標(biāo)本在免疫組化染色中能滿足病理診斷的需要。
2014.10.6
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