GS環保組織制備試劑處理組織HER-2熒光原位雜交檢測（FISH）對比實驗結果

GS環保組織制備試劑處理組織

HER-2熒光原位雜交檢測（FISH）對比實驗結果

病理技術流程中對組織的制備通常使用成本較低的甲醛與二甲苯，使得病理工作者長期承受甲醛、二甲苯等有毒有害試劑的侵害。哈爾濱格林公司研發的GS環保組織制備試劑（包括固定、脫水、透明）該產品以無醛、無苯等環保性得到認可，近年來在全國許多二級、三級醫院得到應用。在寧波病理中心的免疫組化染色技術流程中，該產品是否能滿足病理診斷的需要，需要在我中心的免疫組化染色操作技術流程條件下對其可靠性進行驗證。

一、實驗方案設計

實驗分兩組，一組為實驗組以哈爾濱格林公司GS系列環保組織制備試劑（包括固定、脫水、透明）進行組織取材后組織制備，一組為對照組以常規10%福爾馬林和二甲苯進行取材后組織制備。取寧波病理中心常規取材后乳腺標本3個，每個標本分別取兩塊，分別采用實驗組和對照組試劑，分別置于ThermoPT420和Leica Prorie脫水機進行固定、脫水、透明浸蠟。使用HER-2熒光原位雜交檢驗試劑進行FISH檢測。切片經1名負責分子病理檢測的高級職稱的病理醫師及1名高級職稱技師進行對比觀察，***終核定其病理診斷的可靠性和應用性。

二、實驗過程

（一）試劑選定

  1. 哈爾濱格林公司組織處理試劑

   1.1  GSA-01（組織固定液）

   1.2  GSA-02（組織脫水液I）

   1.3  GSA-03（組織脫水液II）

   1.4  GSA-04（組織透明液）

  2. 常規組織處理試劑

  2.1  10%中******爾馬林

  2.2  75%酒精

  2.3  95%酒精

  2.4  無水酒精

  2.5  二甲苯

 3. 探針

HER-2探針為雅培生物科技公司產品。

（二）標本選定

寧波市臨床病理診斷中心手術標本（常規取材后），每個標本取1-1.5cm×0.5-1cm×0.3cm大小2塊，分別用于實驗組和對照組。

組織類型包括：乳腺導管內癌及浸潤性癌×3

（三）實驗方法

  1. 實驗組用ThermoPT420脫水機進行脫水機內固定、脫水，透明及浸蠟，具體程序：

GSA-01   2h

75%酒精 30min

75%酒精 30min

80%酒精  1h

GSA-02   40min

GSA-02   1h

GSA-03   40min

GSA-03   1h

GSA-04   1h

GSA-04   1.5h

石蠟    1h

石蠟    1h

石蠟    1h

石蠟    1h

  2. 對照組用LeicaPlorie脫水機進行脫水機內固定、脫水、透明及浸蠟，具體程序：

10%中******爾馬林   2h

75%酒精  30min

75%酒精  30min

85%酒精  1h

95%酒精  40min

95%酒精  1h

無水酒精  40min

無水酒精  1h

二甲苯    1h

二甲苯    1h

石蠟      1h

石蠟      1h

石蠟      2h

 3. 熒光原位雜交檢測程序：

對照組及實驗組的切片均按雅培生物科技公司標準優化熒光原位雜交程序進行制片。

 4. 切片判讀

由負責分子病理檢測的高級職稱的病理醫師及技術員對比觀察切片，并記錄。

（四）實驗對比結果

經熒光顯微鏡下對比實驗組與對照組發現：1）兩組均背景干凈，非特異性熒光背景不明顯； 2）兩組的HER-2紅色熒光信號及CEN-17綠色熒光信號均清晰，細胞核DAPI藍色熒光清晰并結構良好；3）兩組的HER-2擴增范圍信號統計后結果一致。

三、實驗對比結論

實驗組與對照組在常用免疫組化染色對比研究中一致性高，無顯著性差異，均達到診斷要求。表明經哈爾濱格林公司組織處理試劑固定脫水透明的標本與常規試劑固定脫水透明的標本在HER-2熒光原位雜交檢測中表達能滿足HER-2 FISH檢測的需要。

                                                                                                                                2014.10.6

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