GS無醛固定液在病理技術中的應用價值

GS無醛固定液在病理技術中的應用價值

聶貴軍　　

吉林省敦化市中醫院病理科

　　摘自：2014年第6期《醫藥前沿》

組織固定是病理技術工作的關鍵步驟，直接決定分子病理檢測和常規染色效果項目的實驗結果。以前我們的病理科普遍都一直使用4%中性甲醛作為常規組織固定液，然而，我們都知道甲醛是一種具有強烈刺激性的揮發性液體，不僅污染環境，而且對我們人體的健康存在著很大的危害。因此我們也一直探尋者能夠找到一種固定液能夠替代甲醛固定液，并且在病理技術上比甲醛固定液的效果更好。哈爾濱格林標本技術開發有限公司研制出一種GS無醛固定液。該種無醛固定液是一種新型的組織固定液，因其不含甲醛，對人體無傷害、環境無污染，是病理技術工作中理想的固定液。本文就GS無醛固定液對不同組織的固定效果進行分析，以驗證其取代甲醛的可行性。
1. 資料和方法
 1.1一般資料 

隨機選取我院腫瘤手術室送檢的新鮮標本6例，其中包括1例結腸癌患者，2例乳腺癌患者，2例淋巴瘤患者以及1例肝癌患者。我院使用的是由哈爾濱格林標本技術開發有限公司研發的GS無醛固定液。抗體包括:PR、ER及 HER2(Roche公司)，CK18、CD20、CDX2、LCA、CD79a及由福州邁新生物技術開發有限公司提供的bcl-2，HER2探針和Vvsis原位雜交試劑盒。
 1.2 方法
　　1.2.1 檢測方法分別切取腫瘤組織及瘤旁正常組織各2份，將其切成2cm×1cm×0.32cm大小的組織塊，放入包埋盒中，分別用無醛固定液（實驗組）和4%中性甲醛固定液（對照組）固定50d，后進行常規脫水、透明、浸蠟和包埋，其中環保型無醛固定液固定的組織用生物組織標本制備套液中的生物組織標本制備脫水液、生物組織標本制備無苯透明液、生物組織標本制備脫水液進行脫水和透明。待所有標本制備完成之后，統一切片進行免疫組化染色，兩組均0.01mol/L檸檬酸鹽緩沖液抗原修復5min。　

1.2.2 免疫組化檢測 乳腺浸潤性都導管癌進行PR和ER檢測；結腸腺癌進行CK20和CEA檢測；肝腺癌進行Her-2和CK8/18 檢測；淋巴瘤癌進行CK5/6檢測；正常淋巴結進行LCA和CD20檢測。反應結果判斷標準參照許良中等建議，采取單盲法由2位初級病理醫師初步比較，***后由2位高級職稱病理醫師審核，

 1.3 統計方法 

將筆者在實驗過程中獲得的數據輸入spss16.0統計學軟件中進行處理。其中計數資料采用卡方檢驗。若檢驗結果p<0.05，說明兩種不同的病例技術之間差異具有統計學意義。

2. 結果
　　在實驗過程中發現，無醛固定液固定的6例標本，在切片中感覺切片厚薄均勻，組織塊軟硬適中，連續性比有醛固定液好。常規HE染色效果良好，細胞核漿相對于甲醛固定液其形態清晰完整，對比明顯。結腸癌病例(CK18、CDX2和LCA)、乳腺癌病例(ER、PR和HER2)、淋巴瘤病例以及肝癌病例行免疫組化染色。染色結果顯示無醛固定液固定的標本組織細胞要比有醛組織液固定的標本組織抗原性保存要好，陽性結果定位準確，背景較為清晰。淋巴瘤病例均行FISH檢測HER2基因擴增狀態，檢測結果顯示細胞核結構完整排列緊密，紅色和綠色熒光信號較好。
　　表1  比較兩組標本中經1、5、10、15、20 d 染色較好的結果比較（例，%）分組 n 1～20d 20～50d >50   
　　無醛固定液固定法 6 3 6 6
　　有醛固定液固定法 6 3 4 5
　　P值 - >0.05 <0.05 <0.05
3. 討論
　　隨著醫學技術的飛速發展，學科之間相互滲透和影響，很多新的病理儀器和技術不斷涌現，我國病理技術有著明顯的變化，大量新方法、新技術、新儀器的應用極大提高了病理技術水平，使我們對病理的認識更加透徹。
　　根據不同固定液會對組織的穿透能力不同，會使細胞內的低分子質量物質、蛋白質、脂類、黏多糖和核酸物質的丟失，而良好的固定液可以避免這一情況的出現增大伸縮性和彈性度、使組織細胞的抗原性得到有例的保存。在過去一段時間甲醛一直是用于固定組織的標準固定液。甲醛固定液具有能長期保存組織，價格低廉，能進行各種特殊染色，保存的組織形態良好，進行抗原修復后的免疫組化染色結果可靠等優點臨床上多用于其進行固定。但隨著醫學的進步和科學的發展我們發現了甲醛固定液也有缺點，包括會形成甲醛色素，與含鐵血黃素相混淆，存放過久可聚合形成三聚甲醛，會對固定的效果產生一定的影響；且免疫組化結果會因為長時間的固定而受到影響。長期接觸甲醛會引發慢性呼吸道疾病、過敏、甚至腫瘤的發生。在我國，無醛固定液尚未得到廣泛應用，但在國外發達國家，已經推廣應用環保型的固定液取代甲醛固定液。

目前甲醛固定法在絕大部分病理科仍然應用作為日常工作中的固定方法。但在保持組織形態學、保存抗原性及DNA/RNA等方面的性能經研究顯示環保型無醛固定液不遜色于甲醛固定液，甚至在很多的醫療方面還要更優于甲醛固定液。本研究結果顯示，固定時間在1～20d時，無醛固定液的免疫組化染色結果和有醛固定液的免疫組化染色結果差異無統計學意義（>0.05），但經過50d的固定時間后，甲醛固定液組的免疫組化陽性結果明顯劣于環保型無醛固定液。另外經我們研究發現無醛組固定1d的免疫組化結果與固定50d的免疫組化結果進行比較，發現兩組差異無統計學意義，說明用環保型無醛固定液長時間固定組織至50d或者更多時間，免疫組化染色結果不會受到任何影響或者影響甚微。而在甲醛組固定20d時，免疫組化結果與固定1d差異有統計學意義（<0.05)，說明甲醛固定液不適宜長時間固定組織，否則會導致抗原丟失，使免疫組化染色結果受到一定程度的影響。
　　GS無醛固定液是一種與甲醛固定組織的時間相同而且無色、******、無異味、無刺激性的環保固定液。我們的研究結果顯示，GS無醛固定液病理科日常工作中與常規4%中性甲醛固定液在免疫組化染色、HE染色、熒光原位雜交等均有相同的效果，完全可以取代甲醛成為病理科常規固定液。

參考文獻
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