格林環(huán)保試劑在全自動(dòng)組織切片染色機(jī)中的應(yīng)用

孫晶  王麗娟  王廣宏  彭俊華  侯紅梅  李雪燕  王浩

棗莊礦業(yè)集團(tuán)中心醫(yī)院病理科

摘自：2014年08期《診斷病理學(xué)雜志》

全自動(dòng)組織切片染色機(jī)以其機(jī)械化的優(yōu)勢(shì)在各級(jí)醫(yī)院 病理科逐漸被廣泛應(yīng)用。其良好的工作性能和穩(wěn)定的染色效果讓其在病理工作中得到接受和肯定。我科在應(yīng)用全自動(dòng)染色機(jī)以來(lái)，使用環(huán)保試劑于常規(guī)染色切片，其染色效率、染色效果都有顯著改觀，染色質(zhì)量得到一定提升和較好的保持。

     1.材料與方法

      1.1 儀器和試劑儀器

         日本SAKURA Tissue-Tek DRS全自動(dòng)組織切片染色機(jī)及附帶設(shè)備。試劑:①格林環(huán)保試劑常規(guī)染色套液（包括脫蠟液、蘇木精、返藍(lán)液、分化液、伊紅、除浮染液、除水透明液和透明液）；②95%乙醇；③100%乙醇。

      1.2 方法常規(guī)石蠟HE染色

將標(biāo)有病理檢查編號(hào)的 4 ~6 pm厚常規(guī)切片依次插入染色架，調(diào)溫78 ~89尤烘（烤 箱烤片20 min，即可上機(jī)染色。一次可染色40張切片，連續(xù) 處理時(shí)每小時(shí)可處理切片約480張，染色液均使用格林環(huán)保 試劑。

染色步驟:①脫蠟水洗:環(huán)保脫蠟液3步，每步5 min；100%、95%和85%乙醇各3 min自來(lái)水洗1 min。②染色分化:環(huán)保試劑蘇木精3 min，自來(lái)水洗1 min；格林環(huán)保試劑分化液或0.3%鹽酸乙醇分化液2 s，自來(lái)水洗1 min 15 s；格林 環(huán)保試劑返藍(lán)液1 min，自來(lái)水洗1 min；格林環(huán)保試劑伊紅 3 min，水洗10 s。③脫水透明：85%和95%乙醇各10 s； 100%乙醇3 min X 2；環(huán)保除水透明液5 min；環(huán)保透明液 5 min X2。④封固：取出染色玻片，稍干燥，使用中性樹(shù)膠全自動(dòng)封片機(jī)封固。

      2.結(jié)果

經(jīng)過(guò)格林環(huán)保試劑處理的組織切片染色均勻鮮亮，顏色對(duì)比度更好、著色更清晰，鏡下核漿對(duì)比效果好。其中子宮內(nèi)膜（圖1，2)、淋巴組織（圖3)、子宮肌瘤和腸組織（圖4)等組織脫水徹底，結(jié)構(gòu)鮮明，切片質(zhì)量高。切片染色的******、染色質(zhì)量的穩(wěn)定，有助于病理診斷工作質(zhì)量的穩(wěn)定和提高。

3.討論

傳統(tǒng)組織切片染色為人工處理，每批次染色條件及時(shí)間受不同技術(shù)人員操作的影響會(huì)有不同的出入，制作周期長(zhǎng)、步驟繁瑣、工作量大，尤其在大批量的組織切片處理中，全自 動(dòng)組織切片染色機(jī)就顯現(xiàn)出其穩(wěn)定、******的優(yōu)勢(shì)。其人性化程序的設(shè)定，既保證近批次切片的染色條件較為一致，又保 證根據(jù)染液使用的時(shí)效來(lái)調(diào)節(jié)時(shí)間，利于保持切片染色效果及質(zhì)量，減少了人為誤差，還可以減少人員投入、減輕工作強(qiáng) 度和改善工作環(huán)境，既具有穩(wěn)定性又具有靈活性，同時(shí)具有******性。配合使用環(huán)保試劑替代傳統(tǒng)試劑甲醛、二甲苯等有 毒、有害、易揮發(fā)、強(qiáng)刺激的試劑，更能減少有毒試劑對(duì)病理工作人員身體的危害，同時(shí)減少產(chǎn)生大量廢液對(duì)環(huán)境造成嚴(yán)重污染。在染色步驟中，不要苛求快速，適當(dāng)、合理的處理時(shí)間可以延長(zhǎng)試劑的使用壽命，減少更換，在保證質(zhì)量的基礎(chǔ) 上，既降低成本又減少排放。在染色過(guò)程中我們總結(jié)了幾點(diǎn)經(jīng)驗(yàn):①環(huán)保脫蠟液可根據(jù)脫蠟的情況適當(dāng)延長(zhǎng)時(shí)間，或從 烘（烤）箱中提出切片后立即放入脫蠟液I中，浸泡數(shù)秒再上機(jī)，可******凝結(jié)在玻片上的小蠟點(diǎn)，脫蠟更徹底；②環(huán)保試劑 蘇木精在全自動(dòng)組織切片染色機(jī)中使用具有染色時(shí)間短、染色時(shí)效長(zhǎng)、染色質(zhì)量穩(wěn)定的優(yōu)勢(shì)，長(zhǎng)期使用較少出現(xiàn)蘇木精沉渣和氧化膜，減少染缸的清潔處理次數(shù)，降低試劑消耗；③ 在程序中增加了乙醇可更好地保護(hù)環(huán)保試劑的純度，延長(zhǎng)試 劑使用壽命。

使用注意事項(xiàng):①每天開(kāi)機(jī)后檢查染缸內(nèi)試劑量，不足的需添加，失效的需更換，尤其注意檢查蘇木精是否出現(xiàn)氧 化膜。脫水梯度試劑和脫蠟液可更換******步，后幾步依次前移，添加***后一步即可。水化的梯度乙醇需同時(shí)更換，其他試劑的更換可根據(jù)使用經(jīng)驗(yàn)和染色效果來(lái)適當(dāng)調(diào)節(jié)。②水洗槽需每天清理，防止霉變及進(jìn)水口、出水口堵塞造成對(duì)染 色效果的影響。③及時(shí)清潔染色缸內(nèi)、外，防止染液溢濺。④每天擦拭機(jī)器表面，注意防塵。

     參考文獻(xiàn)

[1] 孫淑芬，馬福成，李江，等.染色的基本原理/生物染料和蘇木精伊紅染色方法[A].見(jiàn)：王伯沄，李玉松，黃高升，等.病理學(xué)技術(shù)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2000:130 -134.