GS液在胸腹水沉渣切片中的應用

孫廷誼  李真  謝紅建  孔令非

河南省人民醫院病理科

摘自：2014年第07期《診斷病理學雜志》

胸腹水的細胞學檢查對疾病的臨床******有重要的指導作用。常規檢查方法是將胸腹水進行離心后涂片再染色鏡檢，由于該方法存在涂片后細胞重疊、結構不太清晰、陽性檢出率不高等缺點，因而現在常使用胸腹水沉渣石蠟包埋切片方法來提高胸腹水細胞學的陽性率。沉渣包埋常用甲醛做固定液，而甲醛為有毒、有害試劑，所以我們改用GS環保試劑來固定胸腹水沉渣，取得了較為理想的效果。

 1. 材料與方法

  1.1 材料

收集河南省人民醫院病理科2011~07—2013-12 間送檢的胸腹水標本共196例，其中胸水136例，腹水 60例。

主要儀器和試劑：Leica染色封片一體機，Leica~Band- Max全自動免疫組化染色儀，GS系列環保試劑（哈爾濱格林標本技術開發有限公司）。免疫組化試劑AE1/AE3、CEA MC、vimentin和MaxVision~2及試劑盒均購于福州邁新生物技術開發有限公司。

  1.2 方法

   1.2.1標本處理

選取新鮮的胸腹水，每例標本分成2組，混勻后每份抽取胸腹水約50 ml置于2個離心管中，2000 r/ min離心10 min，棄上清；在試管底部沉淀物中加入50%乙醇，邊加邊搖，使離心管底部沉淀物分散、溶解直至色變淺紅，這時再次2000 r/min離心5 min，去除上清液，一組加入4%中性甲醛固定，離心后靜置3 ~6h，棄甲醛液，將沉淀物 放入組織脫水盒后進行常規脫水、透明、浸蠟、包埋制成蠟 塊，此為常規組。另一組加入GS無醛固定液進行固定，離心后靜置3 ~6 h，棄固定液，將沉淀物放入組織脫水盒后進行GS系列處理制成蠟塊，稱為GS組。

   1.2.2實驗方法

將常規組和GS組的蠟塊統一切片，切片厚3 pm， HE染色用普通載玻片制片，烤片3 min;免疫組化染色切片用防脫載玻片制片，65T：烤片60 min。每個蠟塊均標記AE1/AE3、CEA、MC和vimentin共4種抗體。為了使免疫組化染色更具有可比性，同一病例的2組蠟塊放在一批，選用相同的染色條件，在同一臺染色機上進行染色。用已知陽性切片作為陽性對照，用PBS緩沖液代替一抗作陰性對照。HE染色按常規進行染色，免疫組化按試劑盒說明書進行，分別用手工和全自動染色機操作。染色結果由2位資深病理醫師進行判讀。

 2. 結果

  2.1 HE染色

2組切片染色后薄厚比較均勻，著色效果良好，細胞形態比較完整，組織結構顯示也較清晰，色彩比較鮮艷，核漿對比也比較分明，染色結果比較二者并無顯著差異。

  2.2免疫組化染色

2組切片經手工和全自動染色機兩種 方式染色后，均未發現脫片現象，細胞形態結構完整，陽性定 位準確，背景比較清晰，非特異性著色少，陽性對照和陰性對 照表達均正常，兩種免疫組化染色的結果未見明顯差異。

 3. 討論

胸腹水沉渣石蠟包埋切片的優點是能收集到較多的有核細胞，使得切片上的細胞相對比較集中，而且細胞結構也比較清晰，大大提高了胸腹水細胞的陽性檢出率。胸腹水沉渣石蠟包埋的蠟塊可以和組織一樣反復連續切片，避免了單一涂片取材的局限性，可以運用多種抗體進行免疫組化標記，以滿足診斷的需要，而且染色時不容易出現掉片現象，陽性定位準確可靠，非特異性著色少，背景清晰，增加了脫落細胞的診斷價值。

GS環保試劑不含二甲苯、甲醛等有毒、有害物質，具有較強的固定、脫水及脫脂作用，不但對組織滲透性強，縮短了脫水時間，而且還能保持良好的組織形態學結構，不會出現細胞空泡和核固縮現象，同時還能保護完整的細胞膜，能充分保護組織中的核酸和抗原不被降解、擴散或破壞，對RNA和DNA保存較理想，也有利于顯示出細胞的亞結構。本實驗顯示，用GS環保試劑固定處理胸腹水沉渣，石蠟包埋切片的HE染色和免疫組化染色均取得了理想的效果，完全可以替代甲醛應用于細胞學的檢查。

參考文獻

[1] 付海洋，王成勤，趙潔，等.快速石蠟法在胸腹水細胞蠟塊制作中應用[J].臨床與實驗病理學雜志，2012， 28 (7) :820 -821.

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[3] 董建強，王德田.格林標本——新一代環保型病理組織標本固定脫水透明試劑試用報告[C].2011年全國病理技術新進展研討會論文匯編