GS環(huán)保型病理組織標(biāo)本固定脫水透明試劑應(yīng)用報(bào)告

 GS環(huán)保型病理組織標(biāo)本

固定脫水透明試劑應(yīng)用報(bào)告

    王德田    董建強(qiáng)

北京協(xié)和醫(yī)院    北京大學(xué)人民醫(yī)院 

采用甲醛固定、乙醇脫水、二甲苯透明、石蠟包埋的石蠟包埋切片和蘇木素染色技術(shù)自十九世紀(jì)創(chuàng)立以來(lái)（1860－1870年）一直沿用至今。是一個(gè)良好的組織病理學(xué)技術(shù)方法。但是以今天的眼光來(lái)看，傳統(tǒng)石蠟切片制作和染色方法中使用的甲醛和二甲苯存在著對(duì)職業(yè)工作環(huán)境和排放后對(duì)生活環(huán)境的***害和污染。近年來(lái)隨著人們環(huán)保意識(shí)的提高，人們對(duì)潔凈的飲水、食品安全、符合健康要求的家居環(huán)境極為重視并想方設(shè)法不惜以較為高昂的代價(jià)獲得綠色健康的生活空間。因此，減少或完全替代甲醛和苯系化學(xué)***害試劑的使用，建立一套替代技術(shù)取代石蠟包埋切片技術(shù)中上述***害試劑的使用是一項(xiàng)意義重大的工作。近十年來(lái)，國(guó)內(nèi)外相繼推出了數(shù)種甲醛和二甲苯的替代品，這些產(chǎn)品或因功能單一不成系統(tǒng)、或因效能不高達(dá)不到技術(shù)要求、或因價(jià)格較高不利普及。但是總結(jié)近年來(lái)會(huì)議交流和文獻(xiàn)報(bào)道，可以看出這些替代產(chǎn)品的推出和試用代表了方向也積累了局部的使用經(jīng)驗(yàn)。

格林標(biāo)本推出的組織固定脫水系列套裝試劑和HE染色系列套裝試劑是國(guó)內(nèi)******個(gè)專(zhuān)業(yè)廠(chǎng)家推出的******套環(huán)保型套裝系列試劑。2009年3月始我們對(duì)格林標(biāo)本的上述試劑進(jìn)行了試用和技術(shù)測(cè)試，現(xiàn)將試用和技術(shù)測(cè)試的結(jié)果報(bào)告如下以供大家借鑒和討論交流。

一、《組織固定劑》

1. 密封瓶裝、為微******透明液體基本無(wú)味。

2. 《組織固定劑》既可以用于各種手術(shù)切除病理標(biāo)本及各種活檢標(biāo)本的固定也可用于標(biāo)本取材后組織脫水過(guò)程的后固定。

3. 《組織固定劑》的穿透速率與甲醛相比大致相同，對(duì)組織細(xì)胞形態(tài)的固定效果良好，可以替代甲醛對(duì)病理標(biāo)本進(jìn)行固定。對(duì)于手術(shù)切除的大標(biāo)本，建議執(zhí)行與使用甲醛固定標(biāo)本的技術(shù)規(guī)范。固定劑的使用量應(yīng)為標(biāo)本體積的4-6倍并應(yīng)切開(kāi)固定。

4. 《組織固定劑》在組織脫水機(jī)上作為后固定劑使用時(shí)，后固定時(shí)間與使用標(biāo)準(zhǔn)緩沖甲醛相同。與甲醛相比，該固定劑即使較長(zhǎng)時(shí)間的后固定也不致使組織塊過(guò)度硬化。

5. 《組織固定劑》在組織脫水機(jī)上作為后固定劑使用時(shí)，組織塊的處理量在組織取材平均大小為1.5X1.2X0.4cm標(biāo)準(zhǔn)情況下為每1000毫升處理800到1000塊組織。

6. 對(duì)于使用甲醛固定的標(biāo)本取材后使用該固定劑進(jìn)行后固定，組織細(xì)胞的固定效果大致相同。

二、組織固定脫水系列套裝試劑

1. 該系列套裝試劑由 組織固定劑、組織脫水劑I、組織脫水劑II、組織透明劑、和石蠟組成。

2. 組織固定劑的性能和使用如前述。組織脫水劑I、組織脫水劑II、為淡******透明液體，略有醇類(lèi)氣味。組織透明劑為無(wú)色透明液體，基本無(wú)味。石蠟為純凈塊狀固體。

3. 本套試劑系列組合共同完成對(duì)組織標(biāo)本的固定、脫水、透明、浸蠟的組織處理功能。在試劑技術(shù)測(cè)試的過(guò)程中我們已累計(jì)處理了11萬(wàn)個(gè)以上的各種人體組織標(biāo)本和8200個(gè)以上的不同種類(lèi)的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)標(biāo)本和活檢標(biāo)本。包括：裸鼠、小鼠、大鼠、和山羊、兔、***、貓、猴，以及腎穿刺活檢組織、肝穿刺活檢組織、前列腺活檢組織。

4. 組織固定脫水系列套裝試劑的組織處理效果：大量多種類(lèi)不同組織類(lèi)型的組織脫水實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明，該系列試劑在替代了傳統(tǒng)的甲醛和二甲苯的情況下可以良好地保存組織細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)，并完成對(duì)組織標(biāo)本的脫水透明和浸蠟過(guò)程。包埋后的組織塊可以順利的切制3微米的石蠟切片，對(duì)于腎臟穿刺活檢標(biāo)本可以順利地切制1微米的石蠟切片。

5. 組織固定脫水系列套裝劑的組織處理能力：由于該系列試劑中的組織固定劑本身含有固定和脫水的雙重功能，因此該套試劑的組織脫水能力較強(qiáng)，試驗(yàn)證明每升試劑可以處理800-1000個(gè)標(biāo)準(zhǔn)組織塊。

6. 組織固定脫水系列套裝試劑的寬容度：該系列套裝的組織處理寬容度較高，試驗(yàn)中特意選取了3X4X0.6cm的腎臟腫瘤標(biāo)本和腎穿刺、肝穿刺活檢標(biāo)本同時(shí)進(jìn)行脫水包埋，結(jié)果腎臟腫瘤標(biāo)本硬度柔韌度適中可以順利地切制3微米的石蠟切片。腎穿刺和肝穿刺活檢標(biāo)本也未出現(xiàn)組織處理過(guò)硬的現(xiàn)象且能夠順利地切制1微米的石蠟切片。此外，經(jīng)該系列試劑處理包埋的硬韌組織如子宮肌瘤組織、皮膚組織具有較好的柔韌度有利于切片并較大幅度節(jié)省切片刀片。

7. 組織固定脫水系列套裝試劑的特殊組織染色實(shí)驗(yàn)：經(jīng)該系列試劑脫水包埋制備的組織切片可以良好的進(jìn)行特殊染色。

                                                               糖原染色

                         網(wǎng)狀纖維染色                                                       粘液染色

8. 組織固定脫水系列套裝試劑的免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn):免疫組織化學(xué)染色已經(jīng)是腫瘤病理診斷和鑒別診斷的重要工具，該系列試劑的技術(shù)測(cè)試實(shí)驗(yàn)證明，經(jīng)該系列試劑脫水包埋制備的組織切片用于臨床病理診斷和鑒別診斷常用的幾十種常用一線(xiàn)和二線(xiàn)抗體的免疫組織化學(xué)染色均能獲得良好的染色結(jié)果。

9. 組織固定脫水系列套裝試劑的脫水機(jī)使用方法：由于該系列套裝試劑由 組織固定劑、組織脫水劑I、組織脫水劑II、組織透明劑和浸蠟液Ⅰ、浸蠟液Ⅱ六種試劑組成。因此，在使用不同類(lèi)型的自動(dòng)組織脫水機(jī)進(jìn)行組織處理的情況下會(huì)出現(xiàn)脫水機(jī)試劑槽空槽問(wèn)題。在實(shí)際使用中可以采用以下方法解決：

A 雙置法---即將 組織固定劑、組織脫水劑I、組織脫水劑II、成雙排列使用，對(duì)于成雙排列使用后仍然存有空置脫水試劑槽的脫水機(jī)，可以在組織固定劑后面灌裝75-80%的乙醇加以解決。

B 空載法---許多自動(dòng)組織脫水機(jī)的控制軟件都可以將不欲使用的試劑槽的處理時(shí)間設(shè)置為“00：00”，使用該方法的情況下將脫水程序中空置的試劑槽的脫水時(shí)間設(shè)置為00：00即可。采用以上兩種方法均可以解決空槽問(wèn)題達(dá)到良好的組織處理目的。根據(jù)技術(shù)測(cè)試試驗(yàn)的體會(huì)，采用A 法可使該系列試劑的組織標(biāo)本塊處理能力在原有處理能力的基礎(chǔ)上提高30-50%。

10. 組織固定脫水系列套裝試劑的脫水方案：

A 使用自動(dòng)組織脫水機(jī)利用本系列組織脫水試劑進(jìn)行組織脫水處理時(shí)，如采用 空載法 須將所采用的組織脫水程序中組織脫水的時(shí)間按比例平均分配到組織脫水劑I 和組織脫水劑II、其余試劑處理的時(shí)間不變。

B 采用 雙置法 的情況下不需更改原使用的脫水程序。

    使用雙置法的組織脫水方案（Leica-ASP200）

儲(chǔ)槽     試劑        外檢標(biāo)本  大動(dòng)物     大小鼠   穿刺活檢

1號(hào)  組織固定液 1      60分     20分     20分      10分

2號(hào)  組織固定液 2     180分     30分     20分      10分

3號(hào)  75％乙醇          5分     50分     30分      20分

4號(hào)  90％乙醇          5分     50分     30分      20分

5號(hào)  組織脫水液  I     30分     60分     30分      20分

6號(hào)  組織脫水液  I     60分     60分     30分      20分

7號(hào)  組織脫水液 II     30分     30分     30分      20分

8號(hào)  組織脫水液 II     60分     30分     30分      20分

9號(hào)  組織透明液  1     60分     30分     20分      20分

10號(hào) 組織透明液  2     90分     30分     20分      20分

組織浸蠟液  I    120分     20分     10分      10分

組織浸蠟液II     90分     30分     20分      10分

58⁰C 切片石蠟     60分     30分     20分      10分

      脫水程序時(shí)長(zhǎng)     14小時(shí)    8小時(shí)    5小時(shí)      3小時(shí)30分

11號(hào) 工作缸清洗液 I    自動(dòng)標(biāo)準(zhǔn)清洗程序

12號(hào) 工作缸清洗液 II   自動(dòng)標(biāo)準(zhǔn)清洗程序

13號(hào) 無(wú)水乙醇          自動(dòng)標(biāo)準(zhǔn)清洗程序

    該系列試劑套裝為使用自動(dòng)組織脫水機(jī)的用戶(hù)配置了無(wú)苯的脫水機(jī)管路及反應(yīng)器清洗劑。實(shí)驗(yàn)證明該清洗劑可以替代二甲苯對(duì)脫水機(jī)管路及反應(yīng)器進(jìn)行良好的清洗，在試驗(yàn)進(jìn)行至今的時(shí)間內(nèi)未見(jiàn)對(duì)實(shí)驗(yàn)使用的SAKURA 和 LEICA 自動(dòng)組織脫水機(jī)的試劑儲(chǔ)槽、反應(yīng)器及管路系統(tǒng)造成不良影響。

三、HE染色系列套裝試劑

1. HE染色系列套裝試劑的物理性狀與脫水系列大致相同。

2. 蘇木素染色液和伊紅染色液的染色力強(qiáng)，顏色鮮艷。

3. 無(wú)苯型脫蠟劑在室溫2X5分鐘切片脫蠟的條件下可以對(duì)組織切片進(jìn)行良好的脫蠟，（組化染色建議3X5分解脫蠟）。

4. 利用該系列染色試劑采用自動(dòng)組織染色機(jī)方法進(jìn)行染色時(shí)，由于使用現(xiàn)有的不同類(lèi)型的自動(dòng)組織染色機(jī)同樣會(huì)出現(xiàn)染色試劑槽空置的問(wèn)題，建議采用以下方法加以解決：切片脫蠟可以采用3X5分鐘、在切片脫蠟后的每個(gè)空置染色試劑槽中灌裝95%乙醇、在蘇木素染色并水洗后保留分化水洗步驟、在組織切片進(jìn)行透明處理前增加無(wú)水乙醇1到2個(gè)步驟然后進(jìn)行切片透明封固。

5. 染色系列試劑中的無(wú)苯型封片膠透明度及封片效果良好可以替代傳統(tǒng)以二甲苯為溶劑的封片膠封固切片，減少室內(nèi)的***害氣體污染。

格林標(biāo)本---推出的組織固定脫水系列套裝試劑和HE染色系列套裝試劑是國(guó)內(nèi)******個(gè)專(zhuān)業(yè)廠(chǎng)家推出的******套環(huán)保型套裝系列試劑。經(jīng)上述實(shí)際技術(shù)測(cè)試結(jié)果顯示：該系列試劑完全可以替代傳統(tǒng)的以甲醛二甲苯為主體的石蠟切片技術(shù)流程，減少室內(nèi)有***有害氣體的污染和***害作用同時(shí)杜絕大量排放此類(lèi)***害化學(xué)物質(zhì)對(duì)生活環(huán)境的污染。期望廣大病理界的同道們積極的參與到此類(lèi)新型環(huán)保試劑的應(yīng)用和技術(shù)實(shí)踐中來(lái)，為此類(lèi)新型環(huán)保型試劑技術(shù)性能的提高和不斷完善提供更加充分詳實(shí)的技術(shù)信息和使用經(jīng)驗(yàn)。

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