對照檢測GS試劑對組織抗原的影響

對照檢測GS試劑對組織抗原的影響

孫廷誼  李真  謝紅建  孔令非

河南省人民醫院病理科

摘自：2014年05期《診斷病理學雜志》

目前，經過GS試劑處理制作的蠟塊在放置較長時間后 對組織抗原的保存效果的報道卻較少。因此，我們通過免疫組化染色和分子學檢測，對60例標本組織中21種抗體進行了回顧性檢測，測試經GS試劑處理制作的蠟塊經過2年放置后組織抗原的保存情況。

1.材料與方法

 1.1材料

選取河南省人民醫院病理科2011-J7—12間手術切除標本60例，其中乳腺癌、結腸癌、卵巢癌、宮頸癌、間質瘤、胃癌、前列腺、腦組織、淋巴瘤、扁桃體各6例，所有腫瘤均經病理證實，患者術前未進行化、放療。將每例標本的同一部位先切取一塊較大組織，再將這一塊較大組織塊從中間切開，一塊制作為常規蠟塊組，另一塊制作為GS蠟塊組。 兩組共120個蠟塊在本次實驗之前均經過2年的放置。

免疫組化抗體 ER、PR、HER4、Ki~67、AE1/AE3、CD117、 DOG4、GFAP、p53、NF 為 Dako 公司產品，CA125、CA19~9、 p16、actin、p63、PSA、CD34、LCA、CD3、CD20、CD10 和 MaxVision~2試劑盒均購置自福州邁新生物技術開發有限公司。GS環保試劑全部購于哈爾濱格林標本技術開發有限公司。HER-基因擴增檢測試劑盒購自于北京市金菩嘉醫療科技公司。

 1.2 方法

  1.2.1 相互對照

所有蠟塊進行切片時，把原來取材時同部位一分為二的兩塊組織重新黏貼在同一張載玻片上，每張玻片近標簽端黏貼常規蠟塊組的切片，遠標簽端黏貼GS蠟塊組的切片，兩個組織片的間距>0. 3 cm，這樣使原來同一部位被2個組的組織切片在同一載玻片上相互對照。再將傳統HE染色和GS染液HE染色設為對照組，將免疫組化手工染色和全自動染色也設為對照組。所有切片厚3 μm， HE染色切片用普通載玻片制片，免疫組化染色的切片用防脫載玻片制片。

  1.2.2  實驗對照

乳腺癌組織檢ER、PR和c-ab~B2；胃 癌檢測AE1/AE3和actin；前列腺檢測p63和PSA；腦組織檢測GFAP和NF；扁桃體檢測CD3和CD10；結腸癌組織檢測 CA19~9和p53；卵巢癌組織檢測CA125和CD34；宮頸癌組織檢測p16和Ki-67；間質瘤組織檢測CD117和DOG - 1；淋巴瘤組織檢測CD20和LCA。21種抗體均另設陰性和陽性對照，用已知陽性的切片作為陽性對照，用PBS緩沖液代替一 抗作為陰性對照。

FISH檢測則選擇6例乳腺癌中2例HER4染色為3 + 的標本進行檢測，同樣每張載玻片上也黏貼常規蠟塊組和 GS蠟塊組兩種HER~2染色為3 +的切片。操作步驟嚴格依據說明書進行。

 1.3結果

判定所有染色均經2位資深病理醫師采用雙盲法判讀。浸潤性乳腺癌細胞核內橘紅色HER4基因的熒光 信號與17號染色體的綠色熒光信號的比值>2.2時為 HER4基因擴增，<1.8為無擴增，1.8 ~2.2需要再計數30個細胞核中的信號情況。

 

2. 結果

 2.1 HE

同一載玻片上2種切片相比無明顯差異，傳統和GS染液染色結果也無明顯差異，染色后細胞形態比較完整，組織結構顯示得比較清晰，色彩較鮮艷，核漿對比比較分明，染色效果均顯示良好。

 2.2免疫組化

同一載玻片上2種切片染色結果無明顯差 異。手工與全自動染色切片結果也無明顯差異。免疫組化染色后組織結構較完整、無脫片、著色均勻，陽性定位準確、 無非特異性著色、背景較清晰、容易判讀。陰性對照切片無著色，細胞核藍染，背景也清晰。

 2.3 FISH

2例浸潤性乳腺癌HER2 (3+)的標本均能看到呈簇狀分布的紅色信號，細胞核結構完整，紅色和綠色的熒光信號較好，對比清晰。

3. 討論

GS試劑對組織的滲透性較強，可以使脫水時間縮短，具有較強的固定、脫水、脫脂作用，處理后組織的軟硬度較適 中，不容易使組織收縮過度，也不容易出現細胞空泡現象與核固縮現象，可以使組織形態學結構保持良好，細胞膜的完 整性也得到相應保護，保護了組織中的核酸和抗原，所以對組織中的DNA和RNA保存效果較好。

本次實驗在同一載玻片上均黏附原來同一部位同一組織被切開分別處理的常規蠟塊組和GS蠟塊組的組織切片 作為相互對照進行染色，充分保證了兩組的組織切片是在同一環境條件下進行的各種染色，使得結果更加真實、可靠。 結果顯示，經GS試劑處理后制作的蠟塊經過較長時間（>2 年）放置后組織抗原依然保存較好。
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