回顧性測試GS試劑處理的蠟塊組織抗原的保存效果

回顧性測試GS試劑處理的蠟塊組織抗原的保存效果

孫廷誼  謝紅建  孔令非

 河南省人民醫院病理科

摘自：2013年05期《診斷病理學雜志》

GS系列環保型病理試劑是一套國內研制的甲醛和二甲苯替代試劑，它可以替代傳統的以甲醛二甲苯為主體的石蠟切片技術流程，減少室內有毒有害氣體的污染和毒害作用，同時杜絕大量排放此類毒害化學物質對生活環境的污染，隨著GS試劑使用的推廣，GS試劑處理制作的蠟塊放置后組織抗原的保存狀況也應該引起大家的重視。

    1.材料與方法

      1.1 材料

選取河南省人民醫院病理科2011-7月一 12 月，手術切除標本80例，其中乳腺癌20例，胃癌20例，前列腺、腦組織、淋巴瘤、扁桃體組織各10例，乳腺癌、胃癌均經 病理證實，患者術前未進行放療或化療。取材時相同部位取2份。常規蠟塊組:1份常規固定、脫水透明制作蠟塊；GS蠟 塊組:1份經GS無醛固定液固定、GS系列脫水透明套液試劑制作蠟塊，2組蠟塊均經過1年以上時間的放置。

主要儀器和試劑Leica染-封一體機，Leica~Band全自 動免疫組化染色儀，Leica 機用 Bond Polymer Refine Detection 染色試劑盒。免疫組化抗體ER、PR、Ki~67、AE1/AE3、 GFAP、NF 為 DAKO 公司產品，actin、P63、PSA、CD34、LCA、 CD3、CD20、CD10、vimentin (MAB—)178)和 Maxvision 試劑盒均購置于福州邁新生物技術公司。GS系列試劑購置于哈爾濱格林標本技術開發有限公司。

     1.2方法

1.2.1實驗  對照常規蠟塊組和GS蠟塊組所有蠟塊統一進行切片，每個蠟塊連續切片用防脫載玻片制片厚3|xm，65T：烤片 60min。乳腺癌檢測 ER、PR、Ki~67 和 vimentin，胃癌檢測AE1/AE3、actin和vimentin，前列腺檢測p63、PSA和 vimentin，腦組織檢測GFAP、NF和vimentin，淋巴瘤檢測 CD34、LCA 和 vimentin，扁桃體檢測 CD3、CD20、CD10 和 vimentin，用已知陽性切片作陽性對照，用PBS緩沖液代替一抗作陰性對照。

        1.2.2傳統HE染色  略。

1.2.3 GS環保型染液HE染色  GS套染試劑染色，無苯封片膠封片。

1.2.4 免疫組化手工染色  每種抗體采用相應抗原修復方法，一抗室溫醇育1h，Maxvision二抗室溫醇育15min，DAB 顯色，復染、脫水、透明，中性樹膠封片。

1.2.5全自動免疫組化染色  嚴格按Leica~Band全自動免疫組化染色儀SOP文件操作。

   2. 結果

      2.1 HE染色

GS蠟塊組與常規蠟塊組HE染色效果良好，細胞形態完整，組織結構顯示清晰，色彩鮮艷，核質對比分明，染色結果相2組無明顯差異。

      2.2 免疫組化染色

GS蠟塊組與常規蠟塊組兩組切片經手工染色與全自動染色后切片組織結構完整、無脫片現象、著色均勻、陽性結果定位準確、無非特異性著色、背景清晰、 易判斷，兩組免疫組化染色結果未見明顯差異。陰性對照切片無DAB著色，細胞核藍染，背景清晰。每個蠟塊均做檢測的vimentin胞質著色，定位準確，背景清晰，兩組免疫組化染色結果也未見明顯差異。

   3. 討論

GS試劑不含甲醛、二甲苯等有毒有害物質，運用界面化學及電荷占位原理，對組織標本進行脫水、透明和浸蠟，而且有較強的固定、脫水、脫脂兼硬化作用，不易導致組織過度收 縮，無細胞空泡與核固縮現象產生，處理的組織軟硬適中，尤 其對脂肪、淋巴組織等的處理效果較好，處理較堅韌的子宮肌瘤、皮膚組織也能使其具有較好的柔韌度而有利于切片。GS試劑對組織滲透性強，能縮短脫水時間，能保持良好的組 織形態學結構，同時能保護細胞膜的完整性，能保護組織中的抗原和核酸不被破壞、降解或擴散，對DNA和 RNA保存較佳，也有利于顯示細胞的亞結構。以vimentin 作為對照，是為了觀察組織經甲醛固定后預期抗原表達的敏感性，按固定后抗原損傷的程度來進行分析。vimentin幾乎 在任何組織中都有表達，在與上皮組織相連接的間質中存在著大量的血管vimentin可陽性表達，如果在同一張切片的間 質中出現vimentin染色微弱或部分區域變弱的情況，表明是不當的處理導致抗原破壞。本實驗vimentin胞質著色，定位 準確、背景清晰，結果可靠，證明標本組織的細胞抗原性保存良好。GS蠟塊組與常規蠟塊組切片經免疫組化后組織結構完整，無脫片現象，著色均勻，陽性結果定位準確，無非特異性著色，兩組免疫組化染色結果未見明顯差異。我們體會到 用GS無醛固定液固定、GS系列脫水透明套液試劑制作的組織蠟塊，在經過相對較長一段時間放置后切片所做的手工和 全自動免疫組化染色均能取得滿意的結果。

參考文獻：

[1]田玉旺，朱紅艷，李琳，等.GS環保試劑在病理制片中技術 工作中的應用.2011年全國病理技術新進展研討會論文匯 編，20113.25 -28.

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