環(huán)保試劑在胸腹水細胞蠟塊制作中的應(yīng)用

環(huán)保試劑在胸腹水細胞蠟塊制作中的應(yīng)用

付海洋    王成勤   趙潔 

青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院病理科  青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院病理學(xué)教研室

【摘要】目的 探討細胞快速石蠟法在胸腹水診斷中的應(yīng)用。

方法 對送檢胸腹水進行常規(guī)涂片處理和快速石蠟處理，對結(jié)果進行比較。

結(jié)果 經(jīng)環(huán)保試劑處理后的細胞蠟塊不僅可行多項免疫組化染色，提高陽性率，而且大大縮短了報告時間。此法優(yōu)于LCT和TCT法，優(yōu)于常規(guī)直接涂片法。

【關(guān)鍵詞】胸腹水，細胞蠟塊，環(huán)保試劑，免疫組化

隨著惡性腫瘤發(fā)病率的提高，胸腹水的檢查因其簡便、快速、易行等優(yōu)點而越來越普遍，但是，常規(guī)胸腹水涂片的陽性率普遍偏低，涂片上腫瘤細胞量少且不適用于后期的免疫組化鑒別診斷，對腫瘤疾病的鑒別診斷帶來了一定的困難。本文采用細胞蠟塊環(huán)保快速石蠟制作法，不僅大大提高了其陽性結(jié)果的準(zhǔn)確率，而且縮短了制作時間，并可應(yīng)用免疫組化行鑒別診斷，其方法如下：

1、材料

收集我院2012年1月至2012年3月病人送檢的胸腹水標(biāo)本20例。儀器佛山鈞鎰JYCL—2型超聲處理儀。脫水透明及HE染色試劑為哈爾濱格林標(biāo)本技術(shù)開發(fā)有限公司提供的環(huán)保脫水透明試劑及環(huán)保HE染色套液。

2、方法

將送檢的胸腹水靜置1小時，棄去上清液，留取底層胸腹水50ml左右，用吸管取1—2滴制作細胞涂片，置于95%酒精中固定15min后HE染色。剩余的沉淀置于2—4個試管中離心，2000—3000r/min，10min，視離心沉淀量多少進行二次離心或多次離心，以沉淀量不至于太少為準(zhǔn)。棄去上清液，加5—10倍量10%中性緩沖甲醛固定液，將細胞輕輕打散后再次離心，以便充分固定，離心后棄去固定液，滴加新10%中性緩沖甲醛固定液固定30—60分鐘，之后將細胞塊取出用紗布包好進行蠟塊制作。對于細胞量較少的標(biāo)本可加入少許蛋白甘油后再加入無水乙醇10—15ml，混合均勻后再離心，傾去上清液后將沉淀物取出再行處理^[1]。制備流程為：①10%中性緩沖甲醛固定液超聲處理儀處理15min 后水洗；②格林環(huán)保型脫水試劑Ⅰ、Ⅱ及透明試劑處理各45℃ 12min；③浸蠟時間可視標(biāo)本量的多少適當(dāng)靈活掌握，一般為62℃10-20分鐘；④常規(guī)石蠟包埋、切片、格林環(huán)保HE試劑染色及鑒別診斷。

3、結(jié)果

用細胞蠟塊制備的切片細胞數(shù)目明顯增多，尤其是腫瘤細胞，組織結(jié)構(gòu)完整，切片厚薄均勻，與常規(guī)組織切片相比，無明顯差異。對診斷為癌的細胞蠟塊進行免疫組化鑒別診斷，染色結(jié)果均能較好的表達。如圖1為同一例標(biāo)本的兩種不同做法；圖2為細胞蠟塊快速石蠟法；圖3為快速石蠟細胞蠟塊免疫組化染色

4、討論

    4.1胸腹水常規(guī)檢查的方法很多，除離心直接涂片法外，通過技術(shù)設(shè)備的不斷改進，目前比較普遍的方法有LCT和TCT法，經(jīng)其制作的涂片細胞比較集中，分布均勻，形態(tài)清晰，且提高了其陽性診斷率，然而由于其負載的腫瘤細胞少，有時出現(xiàn)細胞成團、重疊、擠壓等現(xiàn)象，而影響病理診斷，且不能滿足后期的免疫組化鑒別診斷。經(jīng)細胞蠟塊制作的切片除具有上述優(yōu)點外，因經(jīng)多次離心，增加了細胞的數(shù)量，并可連續(xù)切片進行免疫組化染色，相比而言更適合臨床病理診斷的需求。

    4.2在其細胞固定上我們采用了10%中性緩沖甲醛固定標(biāo)本。另外使用環(huán)保試劑之前用甲醛固定的細胞標(biāo)本除能較好地保持細胞的形態(tài)，對細胞核進行固定外，更重要的是能較好的保存細胞中的大多數(shù)抗原以便行免疫組化檢查。但甲醛滲透速度較乙醇慢，本文在前固定的基礎(chǔ)上又利用超聲波進行了后固定，加速了甲醛對細胞的滲透和固定，再行脫水透明處理，使HE染色和免疫組化染色都能較好的表達。

    4.3常規(guī)制備蠟塊制作時間需要15-20小時，加上免疫組化染色病人往往要等3-5天才能拿到報告。而本文選用了快速石蠟制作方法，制作時間一般在3小時，大大縮短，提高了工作效率，加上免疫組化染色病人一般第二天就可得到結(jié)果，且制片質(zhì)量與常規(guī)HE相比無差別。對于血細胞量較多的胸腹水有文獻指出可用低滲氯化鉀液和甲醇或50%乙醇進行破壞^[3]，但本文不建議破壞紅細胞以免造成未知原因的腫瘤細胞破壞和其他細胞形態(tài)和排列方式改變。另外快速石蠟制備試劑為環(huán)保試劑，相比二甲苯，對技術(shù)工作者來說有益于身體健康，是一項值得推廣的技術(shù)。

    4.4普通涂片制作過程中吸取的少量胸腹水不能代表整個胸腹水的狀況，且制作完畢之后剩余的胸腹水往往被遺棄，不能重復(fù)利用。而胸腹水細胞蠟塊可以收集整個胸腹腔水中的細胞，且包埋時把細胞塊輕柔打散平鋪在一個層面上，以便觀察大部分細胞的形態(tài)；另外細胞蠟塊可以很好的保存，方便后期的管理和質(zhì)控，因此值得病理技術(shù)工作者推廣。

參考文獻：

[1] 王德田，董建強. 實用現(xiàn)代病理學(xué)技術(shù)[M]. 北京：中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)出版社，2012：324

[2] 王德田，董建強. 實用現(xiàn)代病理學(xué)技術(shù)[M]. 北京：中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)出版社，2012：7

[3] 侯建麗，白榮，于淼.胸腹水脫落細胞學(xué)檢查方法的改進[J].內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)雜志，2006,38（11）：1042-1043

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