GS環(huán)保組織套液制備病理石蠟切片在免疫組化染色中的應(yīng)用

GS環(huán)保組織套液制備病理石蠟切片

在免疫組化染色中的應(yīng)用

                                                                 肖莎  余力  盧賢  羅陸僑

                                                                 南方醫(yī)科大學(xué)珠江醫(yī)院病理科

摘自：2011年全國(guó)病理技術(shù)新進(jìn)展研討會(huì)論文匯編

免疫組化染色及診斷技術(shù)的應(yīng)用日益廣泛，并己成為常規(guī)病理診斷中不可缺少的重要方法及手段，良好的組織前期處理是做好免疫組化染色的前提和基礎(chǔ)。在傳統(tǒng)的組織制備過(guò)程中，甲醛和二甲苯作為常規(guī)試劑被大量使用，而這些試劑對(duì)于人體危害極大，長(zhǎng)期使用可使白細(xì)胞降低，它的氣味可使人產(chǎn)生頭暈、惡心等不適感；而哈爾濱格林標(biāo)本技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司推出的GS組織樣本制備套液是一種無(wú)醛無(wú)苯環(huán)保組織標(biāo)本處理液。我們使用GS組織套 液對(duì)臨床病理組織樣本處理制備石蠟切片，進(jìn)行免疫組化染色，并與傳統(tǒng)組織處理石蠟切片免疫組化染色進(jìn)行比較，現(xiàn)報(bào)告如下。

1.材料與方法

 1.1取臨床送檢乳腺癌、結(jié)腸癌、肺癌、卵巢癌、淋巴瘤各2塊。

取1塊放入10%中性甲醛固定，經(jīng)傳統(tǒng)乙醇、二甲苯脫水、透明浸蠟包埋，做石蠟切片；

取另1塊放入格林GS無(wú)甲醛固定，使用格林GS組織樣本制備套液脫水液、透明液、浸蠟液處理，包埋，做石蠟切片；

GS組織樣本制備程序:

 

序號(hào)	1	2	3	4	5	6	7	8	9
步驟	固定液	固定液	脫水液I	脫水液I	脫水液H	脫水液II	透明液	浸蠟液I	浸蠟液H
產(chǎn)品 編號(hào)	GSA-01 GSB-01	GSA-01 GSB-01	GSA-02 GSB-02	GSA-02 GSB-02	GSA-03 GSB-03	GSA-03 GSB-03	GSA-04 GSB-04	GSA-05	GSA-06

 1.2 免疫組化主要步驟

乳腺癌檢測(cè)ER、PR、C-erb-B2;結(jié)腸癌檢測(cè)CA-199、P53；肺癌檢測(cè)EGFR；卵巢癌檢測(cè) CA-125；淋巴瘤檢測(cè) LCA、CD20、CD45RO。

一抗及MaxVision檢測(cè)試劑盒均來(lái)自福州邁新生物技術(shù)有限公司。

染色步驟：

上述己脫水包埋的組織切片厚4-5nm，常規(guī)脫蠟至水，3%H202溶液室溫下孵育lOmin， PBS沖洗；抗原修復(fù)：根據(jù)一抗推薦要求分別使用ph6.0檸檬酸緩沖液、PH8.0 EDTA緩沖液及胰酶消化液進(jìn)行抗原修復(fù)，PBS沖洗。一抗室溫下lh，其余按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，DAB 顯色5-8min，蘇木素復(fù)染、分化、藍(lán)化、脫水、透明、中性樹(shù)膠封片，光鏡觀察。

3. 結(jié)果

采用格林GS環(huán)保型組織樣本套液制作的組織石蠟切片及采用傳統(tǒng)組織處理制作的石蠟切片，經(jīng)免疫組化染色顯示，細(xì)胞內(nèi)抗原成分保存良好，陽(yáng)性結(jié)果定位準(zhǔn)確，背景清晰。兩組組織樣本處理制備石蠟切片免疫組化染色結(jié)果相比無(wú)明顯差異。

4. 討論

免疫組織化學(xué)染色技術(shù)目前己經(jīng)成為腫瘤病理診斷和鑒別診斷不可缺少的重要工具。一張成功的免疫染色切片與良好組織樣本的前期處理密切相關(guān)，組織固定、脫水的效果，不僅影響病理切片制作的質(zhì)量，更直接影響著免疫染色的結(jié)果。隨著現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)越來(lái)越廣泛地被用于人類疾病研究，基因檢測(cè)等技術(shù)也對(duì)組織前期處理質(zhì)量的要求越來(lái)越高。甲醛作為一種傳統(tǒng)的組織固定劑已被沿用了一個(gè)多世紀(jì)，它對(duì)組織滲透能力強(qiáng)，固定均勻，收縮小，能較好地保存組織結(jié)果，能相對(duì)較好地保存抗原的活性；加之其配制簡(jiǎn)單，價(jià)格低廉，所以至今仍被廣泛應(yīng)用。但眾所周知甲醛具有強(qiáng)烈的毒性：具有強(qiáng)烈的刺激性和腐蝕性，嚴(yán)重影響空氣和環(huán)境的質(zhì)量；長(zhǎng)期接觸會(huì)對(duì)人體造成許多危害。同時(shí)組織樣本在經(jīng)甲醛固定后可引起組織內(nèi)蛋白質(zhì)廣泛交聯(lián)，再進(jìn)行免疫組化染色時(shí)需進(jìn)行抗原修復(fù)。因此，隨著對(duì)實(shí)驗(yàn)環(huán)境安全更高的要求，以及尋找能夠更好保存組織抗原活性、對(duì)組織無(wú)交聯(lián)作用的固定液，就成為病理屆同仁們翹首企盼的愿望。本文作者使用的格林GS組織樣本制備套液中的固定液便是環(huán)保型無(wú)醛復(fù)合固定液，該液體無(wú)味、無(wú)刺激性：其穿透速度與甲醛大致相同，能有效地保存作者內(nèi)抗原活性，免疫組化染色效果良好，完全可以取代甲醛對(duì)組織樣本的固定， 且綠色環(huán)保，可以說(shuō)是固定技術(shù)革命性的突破。

傳統(tǒng)組織樣本石蠟切片制備過(guò)程中，二甲苯被大量使用，二甲苯屬芳香族化合物，對(duì)人體具有較強(qiáng)的毒害作用，且廢棄的二甲苯對(duì)空氣、環(huán)境也會(huì)造成污染；而格林GS環(huán)保套液的透明液為非苯******型復(fù)合試劑，可替代二甲苯對(duì)組織脫水后的透明處理，該透明液對(duì)組織滲透力強(qiáng)、處理溫和，同時(shí)組織樣本較長(zhǎng)時(shí)間浸泡在其中也不會(huì)出現(xiàn)明顯的收縮和硬化，對(duì)后期的切片及各種染色起到了良好的質(zhì)量保障作用。

我科室使用格林GS環(huán)保組織樣本制備套液，完全替代了甲醛及苯類試劑，建成了“綠色實(shí)驗(yàn)室”，科室的同事們?cè)诎踩沫h(huán)境里工作學(xué)校，身心健康都得到了保證。經(jīng)實(shí)際應(yīng)用，環(huán)保型GS組織套液完全適用于病理診斷所需的常規(guī)HE染色及免疫組化染色，值得廣大病理工作者推廣使用。

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添加時(shí)間：2016-04-12 點(diǎn)擊量：1426