GS環保試劑在HPVLI殼蛋白檢測技術中的應用

河南省人民醫院病理科

        摘自：2014年《臨床與試驗病理學雜志》

        原位雜交技術的廣泛應用為各學科的研究帶來突破性進展，其對組織標本的常規處理要求越來越高。在日常病理組織處理過程中，甲醛和二甲苯作為病理常規試劑被大量應用。但是傳統試劑具有強烈的刺激性和一定的毒性，不利于環保和工作人員的健康。作者嘗試應用環保型GS (green specimen)組織樣本制備套液制作組織蠟塊，并應用原位雜交技術檢測HPV L1殼蛋白的表達，以探討GS環保試劑對HPV L1殼蛋白檢測的影響。

1. 材料與方法

 1.1 材料

選取2012年1月-2013年5月河南省人民醫院病理科存檔的子宮頸活檢標本236例。經病毒學檢測均確診為HPV感染。（1)主要儀器設備:組織處理采用德國萊卡公司生產的LEICA ASP300S全自動脫水機；組織包埋采用LEICA EG1150H包埋機；組織切片采用LEICA RM2235 切片機。（2)試劑:GS組織樣本制備套液（GS組織標本固定液、GS組織標本脫水液、GS組織標本透明液、GS組織標本 浸蠟液）（哈爾濱格林公司）。傳統病理脫水試劑包括10% 中******爾馬林、二甲苯、乙醇、58-60 T：石蠟（鄭州派尼化學 試劑廠提供）。（3)人乳頭瘤病毒殼蛋白（HPV L1)染色：采 用CytoReact賽泰細胞/組織人乳頭瘤病毒染色試劑盒。

 1.2 方法

將選取標本隨機平分為A、B兩組，A組采用GS 環保試劑脫水包埋。將取完材的標本放入LEICA ASP300S 全自動脫水機經GS組織制備套液進行處理。具體程序步驟及時間如下：（1) GS組織標本固定液I (1缸）固定1 h， GS組織標本固定液I (2缸）固定3 h；(2) GS組織標本脫水 液I (1缸）脫水40 min， GS組織標本脫水液I (2缸）脫水1 h， GS組織標本脫水液n (1缸）脫水40 min， GS組織標本脫 水液H (2缸）脫水1 h；(3) GS組織標本透明液I (1缸）透明1 h， GS組織標本透明液I (2缸）透明1.5 h；⑷GS組織收稿日期:2013 -12-18標本浸蠟液I、H、n浸透各1 h。之后LEICA EG1150H包埋機石蠟包埋，用LEICA RM2235切片機常規3 pm厚切片。B組采用傳統病理脫水劑脫水包埋，步驟同上。

依據文獻報道1及作者觀察發現GS環保試劑與傳統試劑在HE形態學對比方面無影響，遂篩選出2組子宮頸上皮內瘤變CIN2組織切片進行HE染色。將兩組CIN2病例蠟塊再次3 pm厚切片，進行HPVL1殼蛋白原位雜交檢測。具體步驟詳見CytoReact賽泰細胞/組織人乳頭瘤病毒染色試劑盒使用說明書。注意在整個操作過程中應避免玻片干燥。

每個試劑盒設立平行陽/陰性對照片。作為對照的陽、陰性石蠟切片，制作染色步驟同上。

2. 結果

兩組CIN2標本病例數如下：A組75例，B組58例。 HPV L1殼蛋白為殼蛋白質，陽性部位在細胞核，胞核呈紅色為特異性陽性染色，其它部位的紅染均為非特異性染色。鏡下見明確被紅染的細胞核即可診斷為HPVL1陽性。采用環保型GS組織樣本制備套液制作的標本能檢測組織中相應抗原，定位準確，背景清晰；經GS環保試劑處理的標本染色效果與傳統方法相同（圖1、2)。兩組標本中HPVL1陽性率，差異無統計學意義（P =0.81，表1)。

表1兩組CIN2病例HPVL1殼蛋白陽性表達的差異

組別			HPVL1
		+	陽性率（％)
A組	75	13	17. 3
B組	58	11	19.0
合計	133	24	36. 3

圖1傳統脫水劑:HPV Ll殼蛋白原位雜交檢測效果

  圖2環保試劑脫水:HPV Ll殼蛋白原位雜交檢測效果

下載地址：

添加時間：2016-04-07 點擊量：1191