環(huán)保型GS試劑在特殊染色中的使用

環(huán)保型GS試劑在特殊染色中的使用

信芳杰  管靜靜  邵世宏  趙涵  計(jì)曉彬

青島大學(xué)附屬醫(yī)院

摘自：2014年《臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志》

現(xiàn)代病理學(xué)中免疫組化、細(xì)胞及分子生物學(xué)技術(shù)的應(yīng)用日益廣泛，由于這些技術(shù)需要較高的實(shí)驗(yàn)條件和昂貴的試劑而難以普及。特殊染色技術(shù)以其操作簡(jiǎn)單、檢測(cè)快速和成本低廉等優(yōu)勢(shì)，在臨床病理學(xué)診斷中仍具有重要的應(yīng)用價(jià)值。病理實(shí)驗(yàn)室的環(huán)保問(wèn)題日益受到關(guān)注，甲醛、二甲苯嚴(yán)重影響環(huán)境和健康，尋求一種無(wú)刺激性氣味、******無(wú)害的替代品已成為病理工作者的迫切愿望。新型環(huán)保試劑在常規(guī)HE 染色中已有出色表現(xiàn)，本科室在特殊染色中使用新型保試劑也取得滿意效果，現(xiàn)介紹如下。

1. 材料與方法

1.1材料選取青島大學(xué)附屬醫(yī)院病理科2011年12月——2013年12月。各類(lèi)手術(shù)及活檢組織標(biāo)本，包括腎臟穿刺組織、皮膚、骨髓、肺、膀胱、胃、肝等，每份標(biāo)本均常規(guī)取材2 份，分別進(jìn)行傳統(tǒng)石蠟制片及染色、GS環(huán)保試劑制片及染色。

1.2試劑與儀器傳統(tǒng)石蠟制片及染色試劑包括10%中 ******爾馬林、梯度乙醇、二甲苯、石蠟；GS環(huán)保試劑包括固定液、脫水液、透明液、浸蠟液、除水透明液、GS蘇木精，均為哈爾濱格林公司產(chǎn)品。特殊染色試劑包括PAS染色、Masson 染色、六胺銀染色、PASM-Masson染色、抗酸染色、剛果紅染色、黏液卡紅染色、網(wǎng)狀纖維染色、彈力纖維染色等，由珠海 Baso公司提供。主要儀器有脫水機(jī)Leica ASP300，切片機(jī) Leica 2235，全自動(dòng)染色機(jī)Leica ST5020和封片機(jī)Leica CV5030。

1.3方法

1.3.1傳統(tǒng)石蠟制片常規(guī)取材后，經(jīng)10%中******爾馬林固定，梯度乙醇脫水、二甲苯透明、浸蠟，石蠟包埋。

1.3.2傳統(tǒng)染色方法切片經(jīng)二甲苯脫蠟、梯度乙醇脫水、流水沖洗，按照各種特殊染色的步驟進(jìn)行染色、梯度乙醇脫水、二甲苯透明、中性樹(shù)膠封固。

        圖7動(dòng)脈血管周?chē)M織切HE染色，甲醛色素沉積，影響切片清晰和美觀   

        圖8肺組織切片HE染色，染片后脫水不徹底，出現(xiàn)鏡下水印

        圖9腎臟組織切片HE染色，出現(xiàn)氣泡，既影響美觀，又妨礙閱片

1.3.3GS環(huán)保試劑制片采用雙置法脫水方案：GS無(wú)醛固定液分別為60、180 min；75%乙醇5 min、5%乙醇5 min；脫水液I分別為30、60 min；脫水液n分別為30、60 min；透 明液分別為30、60min；浸蠟液11匕浸蠟液11匕石蠟包埋。

1.3.4GS環(huán)保試劑染色脫蠟液I、n各5 min；梯度乙醇脫水、流水沖洗；按照各特殊染色的步驟進(jìn)行染色；除水透明液2 min；透明液I、n各2 min；無(wú)苯膠封固。

2. 結(jié)果

2.1制片使用GS環(huán)保試劑制作的組織蠟塊，所做切片軟硬適中，連續(xù)性好，厚薄均勻，尤其皮膚、子宮肌瘤等硬韌組織處理后有較好的柔韌度；腎臟穿刺組織較傳統(tǒng)方法更易切出較薄切片；對(duì)脂肪組織處理徹底，能切出完整切片。

2.2染色石蠟切片經(jīng)GS染色套液處理后，11種特殊染色結(jié)果穩(wěn)定，組織結(jié)構(gòu)清晰，著色部位準(zhǔn)確，色澤艷麗分明 (圖1 -4)，且染色時(shí)間縮短，完全可以替代傳統(tǒng)染色試劑。

圖1腎小球************袢僵硬、基膜彌漫性增厚，外周袢分層、雙軌狀，內(nèi)皮下、上皮側(cè)大量嗜復(fù)紅物沉積，PASM-Masson染色

圖2腎小球入球小動(dòng)脈管壁及腎小管基膜透明樣變性，PAS染色

圖3甲狀腺髓樣癌內(nèi)淀粉樣物質(zhì)形成，剛果紅染色

圖4骨髓增生異常綜合征呈陽(yáng)性，網(wǎng)狀纖維染色

3. 討論

目前，雖然分子生物學(xué)方法已滲透到各個(gè)領(lǐng)域，但許多傳統(tǒng)的病理學(xué)特殊染色方法仍然是顯示病原體、組織及細(xì)胞內(nèi)特殊結(jié)構(gòu)經(jīng)濟(jì)、簡(jiǎn)便且可靠的方法。在傳統(tǒng)制片染色中，甲醛為常規(guī)固定劑，二甲苯為******組織透明劑，但甲醛和二甲苯已經(jīng)被******衛(wèi)生組織確定為致癌和致畸形物質(zhì)。格林GS新型環(huán)保試劑******、無(wú)醛、無(wú)刺激性氣味，環(huán)保脫水液和透明液滲透均勻、穩(wěn)定，作用快速溫和，組織處理軟硬適中，不易導(dǎo)致組織過(guò)度收縮，出現(xiàn)組織過(guò)硬現(xiàn)象。本科室在日常工作中，GS環(huán)保套液與全自動(dòng)脫水機(jī)、染色封片工作站配合使用，不僅更加安全環(huán)保，也有利于染色的質(zhì)量控制。

本科室進(jìn)行的十幾種特殊染色中，經(jīng)格林GS新型環(huán)保試劑處理，糖原、淀粉樣物質(zhì)、網(wǎng)狀纖維、含鐵血黃素、抗酸桿菌等均取得較好的固定效果，特殊染色結(jié)果色彩分明，對(duì)比清晰，能夠清楚顯示腎小球************基膜病變、腎間質(zhì)小動(dòng)脈的玻璃樣變性、骨髓穿刺組織中網(wǎng)狀纖維分布、甲狀腺髓樣癌中沉積的淀粉樣物質(zhì)等，其染色效果與傳統(tǒng)制片染色方法相當(dāng)，能夠很好應(yīng)用于病理診斷。

綜上所述，格林GS組織標(biāo)本制片及染色環(huán)保套液可以替代傳統(tǒng)的以甲醛和二甲苯為主體的制片流程，大大降低了日常工作中有毒氣體的濃度，不僅可以制作出可靠穩(wěn)定的組織切片，還有效保證了技術(shù)人員和環(huán)境的健康安全。另外，GS環(huán)保試劑在骨髓穿刺石蠟切片5、免疫組化1、熒光定量 PCR 6等檢測(cè)中，均有穩(wěn)定的表現(xiàn)，若能充分發(fā)揮其優(yōu)勢(shì)，將大大改善病理技術(shù)的工作環(huán)境，帶來(lái)真正的綠色實(shí)驗(yàn)室。

 

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