GS環保固定與傳統固定染色在冷凍切片中應用

GS環保固定與傳統固定染色在冷凍切片中應用

林紅

沈陽市******人民醫院病理科

摘自：2014年20期《臨床研究》

醫生可利用冷凍切片進行準確診斷，而固定與染色是決定冷凍切片是否能達到高水準的關鍵，所以應重視固定液與染液的選擇和應用。目前常見的固定液類目廣泛，但都達不到環保標準，且部分固定液，固定耗時長，顯示效果差，對比度差，且易造成細胞腫脹、變形、空泡，易導致漏診、誤診、延誤******。同時95°%乙醇長時間固定無法保證組織細胞的形態，將固定時間縮短后，使用GS染色套液染色能夠避免以上缺點，制片效果良好。傳統固定液HE套液雖具有較好的臨床效果，但其包含的二甲苯會導致人體神經系統、造血系統受損，且汞成分的使用也達不到環保排放的要求。故本研究主要采用GS固定染色套液對病理切片進行冰凍切片處理，并與傳統固定染色套液進行比較，現報道如下。

1. 資料與方法

 1.1 —般資料

隨機選取2013年6?12月我院手術標本300例，其中有甲狀腺、肝、腎、子宮、輸卵管、腦、卵巢以及腸道等，隨機選擇其中150例進行GS固定染色套液固定（哈爾濱格林標本技術開發有限公司研制并生產），另150例則使用傳統固定液（主要成分為 二甲苯）進行固定。

 1.2 GS固定染色套液制片法及使用制劑

通過無醛型固定液對組織標本進行浸泡，并分別于固定后1、3、6、12、24h提取組織標本進行處理， 使用的設備為SHANDON全自動病理組織固定切片機，依次使用組織固定劑、醫用酒精、無水酒精、組織脫水劑、組織透明劑、浸蠟處理以及石蠟包埋等過程。對病理標本進行切片、HE染色、免疫組化染色和熒光原位雜交檢測等。

 1.3 研究方法及觀察指標

所有標本進行編號，并按照數字隨機法分為兩組，比較兩組使用上出現刺激性氣味、固定效果不佳及染色效果不佳的比例，并對骨組織脫鈣和肺癌TIF-1+固定效果進行比較。

 1.4 統計學處理

應用SPSS13.0進行，計量資料以反±5)表示， 兩組間均數的比較使用（檢驗，組間率的比較采用 x2檢驗，戶 < 0.05為差異有統計學意義。

3. 討論

對手術標本進行組織處理時，組織固定會直接影響染色的效果。傳統的固定組織以甲醛為主。 它能有效穿透組織，較好的保持了組織原有形態， 且使用成本低，所以至今仍被廣泛應用。

甲醛的主要缺點：（1)揮發性強，刺激性和腐蝕性很強，環境 危害嚴重，且難以防護。研究表明，甲醛接觸皮膚會引發皮膚過敏等癥狀。長期使用甲醛還會誘發慢性呼吸道疾病、癌癥發生，白細胞數量減少，記憶力和智力下降。（2)長時間存放的甲醛會部分轉化為 三聚甲醛，導致固定組織標本效果不佳；。(3)甲醛易氧化成甲酸，在進行固定染色時會使標本酸化，導致染色效果不佳；在對陳舊組織固定時，易在組織內形成甲醛色素，從而影響病理診斷。（4)無法固定肝糖原和尿酸。（5)廢液需要進行出來才能排放，處理成本較高。（6)醛類固定液在處理標本時會引發組織內蛋白質交聯，不利于DNA的保存。 隨著對實驗室環境安全要求的提高，研發沒有毒性的甲醛替代品已經迫在眉睫。目前國外已經在這方面有相關研究報道，但國內仍處于落后狀態。

本文選擇了國產GS固定液。GS組織標本固定脫水試劑不但能夠有效軟化組織，且穿透性高。在固定組織的同時還能進行脫水和脫脂。酸性溶液能夠較好的保存DNA。與常規制片效果相似，符合某些腫瘤分子生物學研究要求。因此其能較好應用于組織標本，******無害，符合環保要求。

本研究常規固定法使用的二甲苯被用于傳統組織處理和染色中，它揮發性強，對人體危害極大。會嚴重刺激************和植物神經，長時間接觸會引發頭昏目眩、肢體顫抖、免疫功能減退等，并有致癌效果。 二甲苯還會對環境造成嚴重的污染，如大量廢棄二甲苯進入下水道會導致城市水污染。為克服二甲苯的缺陷，有學者嘗試使用替代品：如脫色汽油、硬脂酸、異丙醇、松節油等，但***終效果仍然不理想。本組選擇的GS環保型固定染色套液，這些試劑都是無非苯******型，完全避免了二甲苯造成的人體傷害及環境污染。GS脫蠟劑，脫蠟完全，時間少。GS透明劑穿透組織能力強，處理組織觸感好，即使是長時間浸泡組織標本也不會引發收縮和硬化現象，不會脆化組織。本研究如圖1?4所示，圖2及圖4相對于圖1和圖3， 其示片更為清晰，且所耗時間短，臨床診斷更明確。

GS脫水液能做到怡當脫水，不會出現脫水不足或過度的問題，可同時處理多個大小組織。GS環保套液無醛、無苯、不易揮發，生物降解難度低，不會造成環境污染。其主要特點：（1)能輕易透過組織，節省脫水時間；（2)不會破壞組織形態學結構，保持細胞膜完好；（3)在固定、脫水、脫脂和硬化方面表現良好，不會造成組織收縮過度、細胞空泡消失與核固縮小等問題； (4)保持了大體標本的觸感，有助于有針對性的分離并切取組織塊，避免脂肪組織標本出現粘滑感及粘稠性，能夠快速有效清潔；(5)避免了組織抗原與蛋白質DNA的 破壞；（6) DNA和RNA保存完整，利于細胞顯示和生物學研究；(7)廢液回收處理方便；（8)染色步驟簡化，節省時間。相比傳統方法制片，GS套液環保效果令人滿意，適用于臨床病理診斷，避免了甲醛和二甲苯產生的負面影響，達到了實驗室環保標準，在病理技術工作中推廣應用的價值巨大。

 

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