GS組織標(biāo)本制備及切片染色套液的使用體會(huì)

GS組織標(biāo)本制備及切片染色套液的使用體會(huì)

趙一嶺 王文勇 馬福成 王伯沄

第四軍醫(yī)大學(xué)基礎(chǔ)部病理學(xué)與病理生理學(xué)教研室暨西京醫(yī)院病理科

摘自：2011年06期《診斷病理學(xué)雜志》

隨著******各國(guó)對(duì)人類健康的關(guān)注程度不斷增加，我國(guó)對(duì)環(huán)保的要求也日趨嚴(yán)格。目前各種實(shí)驗(yàn)室的環(huán)保問(wèn)題已經(jīng)提到了議事日程，其中也包括我們組織病理學(xué)實(shí)驗(yàn)室。人們都非常渴望使用環(huán)保試劑，盡量減少化學(xué)品對(duì)人類的危害。***直接有效的辦法就是使用環(huán)保試劑。目前國(guó)內(nèi)環(huán)保產(chǎn)品的種類還不是很多，能選擇范圍十分有限。而國(guó)外環(huán)保產(chǎn)品，價(jià)格很貴，對(duì)多數(shù)實(shí)驗(yàn)室而言感到非常******。除此之外，我們對(duì)環(huán)保產(chǎn)品的了解也非常膚淺，在解決環(huán)保問(wèn)題上還需要下大力氣。***近我們實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用了由哈爾濱格林標(biāo)本技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司研制并生產(chǎn)的GS組織樣本制備套液及GS病理切片染色套液，總的來(lái)說(shuō)試劑比較穩(wěn)定，結(jié)果可靠，我們使用的基本情況如下。

 1. 材料和方法

  1.1 標(biāo)本

臨床病理來(lái)源的人體組織，有脂肪，淋巴結(jié)，乳腺癌，腎臟，皮膚，和肝臟等；動(dòng)物大、小鼠主要臟器及皮膚、肌肉，骨組織等。

  1.2方法

標(biāo)本取材厚度大約0.3-0.4cm，組織大小0.2×1.5×2cm左右。骨組織大多數(shù)經(jīng)過(guò)酸性脫鈣液脫鈣其中有少部分經(jīng)過(guò)螯合劑EDTA脫鈣。而后采用GS組織樣本制備套液進(jìn)行組織處理。根據(jù)試劑說(shuō)明書(shū)的要求在Leica1050脫水機(jī)程序里進(jìn)行了時(shí)間設(shè)置，組織經(jīng)GS試劑處理后，孝感亞光包埋機(jī)包埋，Leica2135石蠟切片機(jī)切片。GS試劑組織脫水程序設(shè)置表（見(jiàn)表1），以及儲(chǔ)存瓶對(duì)應(yīng)試劑表（見(jiàn)表2）。切片厚度4微米，采用 GS染色套液進(jìn)行HE染色，按照說(shuō)明書(shū)程序執(zhí)行（見(jiàn)表3、4）。

表1   Leica1050脫水機(jī)GS試劑應(yīng)用時(shí)間設(shè)置表

序號(hào)	脫水機(jī)菜單試劑	時(shí)間		對(duì)應(yīng)液體儲(chǔ)存瓶
1	Formalin	1	小時(shí)	GS無(wú)醛固定液Ⅰ
2	Formalin	3	小時(shí)	GS無(wú)醛固定液Ⅰ
3	75%乙醇	5	分鐘	75%乙醇
4	90%乙醇	5	分鐘	90%乙醇
5	ABS	30	分鐘	GS脫水劑Ⅰ
6	ABS	1	小時(shí)	GS脫水劑Ⅰ
7	ABS	30	分鐘	GS脫水劑Ⅱ
8	ABS	1	小時(shí)	GS脫水劑Ⅱ
9	Xylene	1	小時(shí)	GS透明劑
10	Xylene	2	小時(shí)	GS透明劑
11	Paraffin	2	小時(shí)	GS-石蠟（5號(hào)）
12	Paraffin	2	小時(shí)	Leica石蠟
13	Paraffin	1	小時(shí)	Leica石蠟

 

 

表2   儲(chǔ)存瓶對(duì)應(yīng)試劑表

 

表3  GS常規(guī)石蠟組織切片HE染色程序表

序號(hào)	GS	時(shí)間
1	GS脫蠟液Ⅰ	10min
2	GS脫蠟液Ⅰ	10min
3	GS脫蠟液Ⅱ	2min
4	95%乙醇	10s
5	自來(lái)水沖洗	2min
6	GS蘇木精液	3min
7	GS分化液	2min
8	自來(lái)水緩流清洗	2s
9	GS藍(lán)化液	10s
10	自來(lái)水緩流清洗	2min
11	GS伊紅液	1min
12	自來(lái)水緩流清洗	2min
13	GS除浮液	3s
14	無(wú)水乙醇	20s
15	瀝干
16	GS除水透明液	1min
17	瀝干
18	GS透明液	2min
19	GS封片膠封片

表4   肌肉活檢組織冰凍切片GS常規(guī)H.E染色程序表

序號(hào)	GS	時(shí)間
1	GS固定液	2min
2	自來(lái)水緩流清洗	3s
3	GS蘇木精液	2min
4	自來(lái)水緩流清洗	2min
5	GS伊紅液	1min
6	自來(lái)水緩流清洗	3s
7	GS除浮染液	3s
8	瀝干
9	GS透明液	1min
10	GS封片膠封片

 

2. 結(jié)果

傳統(tǒng)試劑和GS試劑脫水處理的組織切片和染色初步比較沒(méi)有發(fā)現(xiàn)不良現(xiàn)象。脂肪組織和皮膚切片要好于傳統(tǒng)試劑脫水處理的組織塊。切片和展片均比較容易。GS試劑處理石蠟組織切片常規(guī)切片厚度4微米，HE染色GS試劑按照說(shuō)明書(shū)程序執(zhí)行，切片染色良好，伊紅顏色鮮艷，著色均勻一致，細(xì)胞核染色清晰，沒(méi)有過(guò)染和著色不良現(xiàn)象，細(xì)胞核和細(xì)胞漿上色均好，對(duì)比明顯，未發(fā)現(xiàn)組織和細(xì)胞有收縮或腫脹。

本實(shí)驗(yàn)室利用GS處理的組織石蠟切片進(jìn)行了H.E染色、Giemsa 、PAS、網(wǎng)狀纖維 Gordon-Sweet、膠原纖維 V.G和Masson染色。均獲得了比較滿意的結(jié)果（見(jiàn)圖3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13）。

 3.討論

自從顯微鏡發(fā)明和利用后，1858年德國(guó)醫(yī)生和細(xì)胞學(xué)家R.Virchow以及1893年德國(guó)人施旺（T,Schwann）創(chuàng)立了細(xì)胞學(xué)說(shuō)。才使生物組織和細(xì)胞形態(tài)研究近百年有了飛躍的發(fā)展，應(yīng)該歸功于組織固定、包埋、切片和染色技術(shù)的發(fā)明和不斷的進(jìn)步。甲醛固定、石蠟切片和HE染色已成為生命科學(xué)（人類，動(dòng)植物）形態(tài)學(xué)觀察應(yīng)用的金標(biāo)準(zhǔn)方法，作為全******通用的常規(guī)技術(shù)，為人類、動(dòng)物和植物組織細(xì)胞形態(tài)學(xué)研究作出了巨大的貢獻(xiàn)。但是，石蠟切片和HE染色方法中所用苯、甲苯和二甲苯、組織固定劑甲醛等對(duì)人和環(huán)境都十分有害。

二甲苯的侵入途徑主要是吸入或經(jīng)皮膚吸收。短期內(nèi)吸入高濃度二甲苯可出現(xiàn)上呼吸道明顯的刺激癥狀、眼結(jié)膜及咽充血、頭暈、惡心、嘔吐、胸悶、四肢無(wú)力、意識(shí)模糊、步態(tài)蹣跚，重者可有躁動(dòng)，抽搐或昏迷，有的可能出現(xiàn)癔病樣發(fā)作。長(zhǎng)期接觸有可能出現(xiàn)神經(jīng)衰弱綜合征，女性出現(xiàn)月經(jīng)異常，常出現(xiàn)皮膚干燥、皸裂、皮炎。

甲醛入侵途徑與二甲苯相同，刺激呼吸道黏膜和眼結(jié)膜，強(qiáng)烈的刺激可引起呼吸困難和眼睛流淚。皮膚接觸可引起皮炎、皸裂難以******。在化學(xué)品安全數(shù)據(jù)表中甲醛被列為致癌劑。

多年來(lái)病理工作者處在二甲苯和甲醛危害之中，由于沒(méi)有更好的代用品，病理工作者難以擺脫二甲苯和甲醛的危害。國(guó)內(nèi)外病理工作者都在試圖尋找一種較為理想的代用品，既環(huán)保又能有效代替二甲苯和甲醛的作用來(lái)滿足病理工作的需要。值得注意的是近幾年來(lái)國(guó)內(nèi)外市場(chǎng)上出現(xiàn)了一些二甲苯和甲醛的代用品，例如，Van-clear環(huán)保透明劑、Clear-Advantage Xylene Substitute Polysciences, Inc.、XS-3?, Xylene Substitute Statlab、NEO-CLEAR? ( 二甲苯替代劑 ) Merck、Zinc Fixative等。環(huán)保試劑正在少數(shù)實(shí)驗(yàn)室里應(yīng)用，由于價(jià)格較貴，貨源少，有的代用品作用確實(shí)還趕不上二甲苯和甲醛的效果。此外，人們對(duì)代用品的性能缺乏了解，到目前為止多數(shù)病理實(shí)驗(yàn)室還在沿用傳統(tǒng)試劑固定和脫水處理。對(duì)環(huán)保試劑還處于認(rèn)識(shí)階段，還沒(méi)有普及應(yīng)用，病理工作人員還沒(méi)有真正走進(jìn)環(huán)保的保護(hù)區(qū)。

因此，對(duì)代用品提出了更高的挑戰(zhàn)。無(wú)論哪種代用品只要效果和二甲苯、甲醛相同，價(jià)格便宜，質(zhì)量可靠的代用品，才能得到推廣。代用品的質(zhì)量能夠讓行業(yè)內(nèi)大多數(shù)人信任才能真正實(shí)現(xiàn)普及應(yīng)用。這樣的代用品才能具有較強(qiáng)的生命力。

哈爾濱格林標(biāo)本技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司******在國(guó)內(nèi)推出環(huán)保型GS組織樣品制備及切片染色套液，它們的產(chǎn)品有組織處理系列（圖1）GS無(wú)醛固定液、組織脫水Ⅰ、組織脫水Ⅱ、組織透明Ⅰ、組織透明Ⅱ、石蠟5號(hào)和石蠟6號(hào)，其中包括自動(dòng)脫水機(jī)的清洗液。組織切片H.E染色系列（圖2）有切片脫蠟液Ⅰ（GS-07）、切片脫蠟液Ⅱ（GS-08）、蘇木精液（GS-09）、伊紅（GS-10）、除浮染液（GS-11）、除水透明液（GS-12）、切片透明液（GS-13）、還有封片膠（GS-02）。該公司的宗旨是健康、環(huán)保、優(yōu)質(zhì)、******。我們相信有這樣的理念一定能為組織實(shí)驗(yàn)室提供有力的環(huán)保支持。這是向百年形成的國(guó)際通用的常規(guī)技術(shù)的挑戰(zhàn)。

總之，GS環(huán)保試劑性能比較穩(wěn)定，H.E染色結(jié)果可靠。完全可以替代甲醛、二甲苯作為常規(guī)組織固定、石蠟切片和HE染色。也適用于多種特殊染色。具有創(chuàng)新和推廣價(jià)值。可以向國(guó)內(nèi)外申請(qǐng)專利，擴(kuò)大市場(chǎng)。在此，衷心感謝哈爾濱格林標(biāo)本技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司為病理同行作出的努力，希望貴公司為全國(guó)乃至全******病理同行開(kāi)創(chuàng)一個(gè)無(wú)害環(huán)保的新******。

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