GS無醛固定液在病理技術工作中的應用

GS無醛固定液在病理技術工作中的應用

     謝永強  郭蕾 劉秀云 鄭閃 沈貴華

     中國醫學科學院腫瘤醫院病理科

摘自：2011年02期《診斷病理學雜志》

組織固定是病理技術工作的關鍵步驟，直接決定常規染色效果及分子病理檢測項目的實驗結果。多年以來，病理科一直使用10%中******爾馬林作為常規組織固定液。然而，福爾馬林是一種具有強烈刺激性的揮發性液體，不僅污染環境，而且危害人體健康。無醛固定液是一種新型的組織固定液，因其不含福爾馬林，對人體無傷害，環境無污染，應能成為病理技術工作中理想的固定液。本文就一種新型的無醛固定液對不同組織的固定效果進行如下評價，以驗證其取代福爾馬林的可行性。

1. 材料與方法

 1.1 材料

隨機選擇中國醫學科學院腫瘤醫院手術室送檢的新鮮標本4例，包括乳腺癌2例，結腸癌1例，淋巴瘤1例。

 1.2 儀器和試劑

脫水機（Leica ASP 300型），切片機（Leica2235），Leica染-封一體機，Roche全自動免疫組化染色儀（VENTANA），原位雜交儀（美國ThermoBrite Abbott公司），熒光顯微鏡（OLYMPUS BX51）。無醛固定液（由哈爾濱格林標本技術開發有限公司研制并生產）。ER、PR及HER2(Roche公司)， CK18、CDX2、LCA、CD20、CD79a及Bcl-2為工作液（邁新公司），HER2探針Vysis原位雜交試劑盒（DAKO公司）。

 1.3 固定

分別擇取腫瘤及瘤旁正常組織，切成2.0cm×1.0cm×0.2cm大小的組織塊，裝入包埋盒中，放入無醛固定液中固定12h，常規脫水、包埋、切片^[1]。全自動染色機進行HE染色。

 1.4 免疫組化染色

標本經無醛固定液固定后，石蠟包埋，3m連續切片。以全自動免疫組化染色儀行相應標本的免疫組織化學染色。

 1.5 FISH檢測

2例乳腺癌病例應用Vysis HER2檢測試劑盒，參照試劑盒說明書推薦的步驟操作。

 

2. 結果

使用無醛固定液固定4例標本，在切片中感覺組織塊軟硬適中，切片厚薄均勻，連續性好。常規HE染色效果良好，細胞形態完整，核漿對比清晰(圖1，2)。

乳腺癌病例行ER，PR，HER2免疫組化染色，結腸癌病例行CK18，CDX2，LCA免疫組化染色，淋巴瘤病例行CD20，CD79a，Bcl-2免疫組化染色。染色結果顯示無醛固定液固定的標本組織細胞抗原性保存好，陽性結果定位準確，背景清晰(圖3，4)。

乳腺浸潤性導管癌病例均行FISH檢測HER2基因擴增狀態，檢測結果顯示細胞核結構比較完整，紅色和綠色熒光信號較好，對比清晰(圖5)。

3. 討論

組織固定是病理技術的基礎。組織固定的效果，不僅直接影響病理切片制作的質量，還影響著免疫組化和分子病理的檢測結果。傳統的10%中******爾馬林固定液，對組織滲透能力強，固定均勻，組織收縮小，因此是現在病理科常規固定液。但其也有著明顯的缺點，包括①有刺激性氣味，個別人接觸可導致皮膚過敏；②存放過久可聚合成三聚甲醛，影響固定效果；③易形成甲醛色素，與含鐵血黃素相混淆；④不能固定肝糖原和尿酸；⑤長時間固定影響染色效果^[2]。但其******的缺點是對人體有著極強的危害性，病理科工作人員長期吸入能引起慢性中毒，同時它也是一種致癌物質。因福爾馬林有如此明顯的缺點，長期以來用無醛固定液取代福爾馬林進行組織固定是病理科技術革新的內容之一。

無醛固定液是一種環保固定液，它******、無色、無異味、無刺激性，PH值中性，且與甲醛固定組織的時間相同，可以應用于固定的組織標本。我們的研究結果顯示無醛固定液與常規的10%中******爾馬林固定液在HE染色、免疫組化染色、熒光原位雜交等病理科日常工作中均有相似的效果，可以取代后者成為病理科常規固定液。

 

參考文獻

[1] 周庚寅．組織病理學技術[M]．北京:北京大學醫學出版社，2000，1-2.

[2] 周會芹，楊江輝，余琦等．不同組織固定液對免疫組化結果的影響. 診斷病理學雜志，2009，6（16）：478. 

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